随着大家心心念念的国自然放榜，想必有人欢喜有人忧。相比之前的8月初放榜，今年的8月着实让人煎熬，首先，祝贺所有金榜题名的科研工作者，但同时，落榜的也请不要气馁。在某种程度上来说，科研与炒股有些许类似，紧随科研热点或许能让你迅速扶摇直上，也可能由于门坎太高让你难以望其项背。但抓住一支潜力股，才是让各位能在SCI站稳脚跟的存在。
溶酶体（lysosomes）一般为真核细胞中的一种细胞器；为单层膜包被的囊状结构，大小（在电镜下显示多为球形，但存在橄球形）直径约0.～0.8微米，如下图；内含多种水解酶，专为分解各种外源和内源的大分子物质。年由比利时学者CristiandeDuve(-)等人在鼠肝细胞中发现。
当我们以溶酶体为关键词搜寻近五年的溶酶体相关国自然中标项目有足足项。
科研“热点“没赶上趟？那这个”温点“你绝对不能错过了！
如我们之前的推文所说，溶酶体在多个领域均能开花，且均有高分SCI文章发表。
今天我们通过文献分享为深度解析一下，溶酶体在谱写SCI文章方面的运用。
文章标题：ActivationoflysosomalmediatedcelldeathinthecourseofautophagybymTORC1inhibitor
研究背景：自噬是保守的分解代谢细胞过程，其中溶酶体酶降解缺陷或过量的细胞器和多余的蛋白质。它对于细胞代谢物的再循环也起到了重要作用，其对维持细胞稳态起着至关重要的作用。胰腺癌是最具侵袭性的人类恶性肿瘤之一，并且是癌症相关死亡的第四大原因。通常，胰腺癌患者的存活率非常低，因为诊断期较晚且对可用的治疗手段效果较差。其治疗手段中，各种化疗耐药性是目前可用治疗的主要问题。而研究表明，一些抗癌药物在使用过程中可以引发胰腺癌细胞激活保护性自噬，并使其免于凋亡。因此，探究其靶向治疗机制显得尤为重要。
研究思路：
1、作者首先证明mTORC1抑制剂SDS-可以诱导胰腺癌细胞非凋亡性死亡：
首先通过常规性的实验流式细胞术，观察梯度浓度及梯度时间下，试剂SDS-可以引起胰腺癌细胞系（MIAPaCA-2）非凋亡性死亡，从流式细胞图上可知细胞并未集中在右上、右下象限，说明细胞并不属于晚期凋亡与早期凋亡，而较多的集中在左上坏死细胞区域；通过Westernblot检测PARP1、Caspase-3蛋白的表达并未发生改变，进一步说明SDS-以凋亡方式诱导胰腺癌死亡。
2、作者发现SDS-诱导胰腺癌细胞非凋亡性死亡后，探究SDS-是否通过诱导初级自噬反应影响胰腺癌细胞：
作者使用荧光自噬体标记物GFP-LC3观察到到SDS-组与阳性对照雷帕霉素组荧光强度显著增加，通过Westernblot检测到自噬流LC3Ⅰ、LC3Ⅱ的变化及自噬相关蛋白的变化，如ATG5、ATG7的表达受到轻微影响，而Beclin-1的表达保持不变，衔接蛋白p62/SQSTM1(Sequestosome-1)的表达令人惊讶地上调了几倍，表明自噬流的阻断。说明SDS-处理触发了胰腺癌细胞中初级自噬反应的启动。
3、作者证明SDS-通过抑制mTORC1诱导自噬启动：
mTORC1是一种调节细胞自噬的营养感应激酶，作者通过Westernblot检测了mTORC1及下游底物的活性在SDS-处理下的变化，同时通过mTORC1激活剂与SDS-进行功能挽救实验发现，SDS-通过mTORC1调节细胞的死亡。
4、接下来作者探究SDS-是否能抑制胰腺癌细胞的自噬流量：
通过自噬抑制剂BafilomycinA1或NH4CL（均抑制晚期自噬阶段，抑制溶酶体对自噬小体的降解）与SDS-进行联合实验，发现SDS-不能进一步影响细胞中LC3Ⅱ的表达；而SDS-与自噬激活剂或饥饿共处理时，LC3Ⅱ和p62表达上调，免疫荧光染色也证明了LC3Ⅱ的加强。说明SDS-削弱了自噬流，导致自噬体和溶酶体的积累，从而作为自噬成熟的强效抑制剂。
5、作者探究了SDS-处理后的胰腺癌细胞中溶酶体的状态：
通过免疫荧光与Westernblot分析了溶酶体标记蛋白LAMP1的表达，发现其较对照组均显著表达增加。再通过自噬体荧光探针及电镜观察SDS-所导致的溶酶体的上调与积聚。
6、作者探究了SDS-通过mTORC1在不破坏溶酶体功能的情况下影响自噬：
作者观察了上调mTORC1与SDS-共处理的胰腺癌细胞中的mTORC1与LAMP1免疫荧光染色情况，发现其在正常情况下呈现共定位状态，而SDS-与阳性对照雷帕霉素处理后，显示分散的荧光信号；免疫共沉淀分析也证实这个结果。同时，SDS-与上调mTORC1共处理的胰腺癌细胞中LC3Ⅱ和LAMP-1的表达与对照组相比未见明显改变。上述说明SDS-通过抑制mTORC1在溶酶体膜上定位影响自噬的发生。
7、作者探究了SDS-通过mTORC1对溶酶体生物发生相关下游蛋白转录因子（TFEB）的影响：
Westernblot证明了SDS-处理后，mTORC1的活性介导了TFEB转移至胰腺癌细胞的细胞核中，同时免疫荧光也证实该结果。TFEB敲除后，逆转了SDS-对LAMP-1的表达增强。此外作者还检测了SDS-对溶酶体中的组织蛋白酶的作用，SDS-处理后，组织蛋白酶D和组织蛋白酶L的表达显著增加。
综上：SDS-抑制了mTORC1活性以及自噬体-溶酶体融合。抑制mTORC1后促进了胞质TFEB移位到细胞核中，这又激活溶酶体相关基因的转录，导致溶酶体酶的过度合成和激活，从而影响胰腺癌细胞MIAPaCa-2死亡。